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总黄qu霉毒素检测试剂盒

型 号

产品时间2020-08-06

所属分类真菌毒素检测项目

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产品描述:总黄qu霉毒素检测试剂盒
本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中总qu霉毒素。该测试盒反应孔可拆卸,可测单份样品,也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。
产品概述

总黄qu霉毒素检测试剂盒

总黄qu霉毒素检测试剂盒

本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定谷物中总黄qu霉毒素。该测试盒反应孔可拆卸,可测单份样品,也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。

1 概要
黄qu霉毒素是由qu霉菌属的黄qu霉和寄生qu霉等产生的次级代谢产物。主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄qu霉毒素以AFB1、AFB2、AFG1、AFG2为主,总黄qu霉毒素一般指这四种毒素的总量。黄qu霉毒素属于z强烈的天然致癌物质,肝脏是其主要的靶器官,其中AFB1毒性z强,具有极强的急性du性和致ai性。其检测方法主要有薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC),本试剂盒可以准确快速检测粮谷类和花生及饲料中的总黄qu霉毒素。

2 测定原理
本测试盒用固相酶联免疫吸附原理,利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板,加入黄qu霉毒素B1标准品或样品、总黄qu霉毒素单克隆抗体进行免疫反应后,将未与包被抗原结合的抗体洗去;再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育,加入底物显色,终止液终止后,用酶标仪在450nm处测定OD值。

3 提供的试剂及材料
微孔板………………………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA
5个浓度的AFB1标准溶液各(1mL)……………………………………………直接使用
标准1:0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准2:1.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准3:2.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准4:5.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
标准5:10.0ng/mL    ……………………………………………………….直接使用
AFS单克隆抗体溶液(6mL)……………………………………………………..直接使用
酶标物(12mL). ……………………………………………………………………..直接使用 
显色液(12mL)….. .….. .….. .….. .….. .….. ………………………………….........直接使用
终止液(6mL)……. .….. .….. ………………………………………………………直接使用
浓缩洗液(30mL) ...….……….….. .….. .….. ………………………………………稀释使用
空白对照(6ml)……………………………………………………………………直接使用

4 盒中未提供,需自备物品
4.1 设备
微孔板酶标仪(含450nm):定量分析用
振荡器,粉碎机,微量移液器,量筒,漏斗和容量瓶,快速定性滤纸
4.2 试剂
氯化钠(分析纯)
甲醇(分析纯)
去离子水或蒸馏水

5 操作者注意事项
----标准溶液中含有黄qu霉毒素,应特别小心。
----使用过的玻璃容器及黄qu霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液(10%v/v)浸泡过夜。
----终止液为0.5N硫酸,避免接触皮肤。
----不要使用过了有效日期的试剂盒。
----不要交换使用不同批号盒中的试剂。

6  储存条件
----保存试剂盒于2-8℃。不要冷冻
----显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
----将不用的微孔板放进原锡箔袋中,置2-8℃保存。

7 试剂变质的标志
----0ng/mL标准的吸光度值小于0.5个单位 (A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。

8 样品处理 
样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存
----取5g粉碎的有代表性的样品,加1.25g氯化钠及25mL70% 甲醇-水
----强力振荡3分钟
----用快速定性滤纸过滤
----取1mL滤液,用1%氯化钠溶液稀释10倍
----取50μL稀释液进行分析
*根据需要可以增加样品量,但甲醇溶液的量也应相应增加。 

9  酶标免疫分析程序
9.1注意事项
1.    每次加样后立即将所有试剂放回2-8 ℃
3. 每步操作时间控制在5min内。
4. 孵育过程中应避光。

9.2 试剂稀释
1. 浓缩洗液:使用时用去离子水或蒸馏水与本浓缩液按体积比9:1稀释。

9.3 测定程序
1. 取所需数量的板条插入微孔架,记录样品及标准的位置。
2. 加入50mL标准品或处理好的样品到微孔,每个标准和样品必须使用新的吸头。
3. 将50mL抗总黄qu霉毒素单克隆抗体使用液加入到每个微孔(注意移液器管尖不要接触到放进孔中的液体,避免交叉污染),在适当位置孔加空白对照液100mL,37℃孵育90min。
4. 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,z后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
5. 每孔加入酶标物100mL,37℃孵育60min。
6. 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板3min×3次,z后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
7. 每孔加入显色液100mL(2滴),37℃孵育10 min -12min。
8. 每孔加入终止液50mL(1滴),立即用酶标仪在波长为450nm处测定吸光度值(OD值)。

10 样品浓度计算
以标准溶液OD值与*个标准(0ng/mL)OD值的比值为纵坐标,所对应标准溶液浓度(ng/mL)的对数值为横坐标,制作标准曲线。根据样品OD值与0ng/mL标准OD的比值,从曲线上得到对应点的横坐标,即为AFs浓度的对数值,求得反对数即为测定液中AFs浓度C(ng/mL),按下列公式计算出样品中AFs含量:
AFs含量(mg/kg)= C×K
式中:C:测定液中AFs浓度(ng/mL)
            K: 测定液对样品的稀释倍数(本提取方法为50)

11试剂盒主要技术指标及参数
 测试盒z低检出浓度1.0ng/mL,回收率70%-120%,交叉反应系数小于1%,试剂盒校正曲线的线性范围1.0ng/mL -10.0ng/mL,试剂盒条内变异<10%,条间变异<15%。
 

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